細胞凋亡陽(yáng)性對照試劑盒

公司產(chǎn)品僅供科研使用，下列是產(chǎn)品屬性：

商品介紹：

本試劑盒含有兩種不同的細胞凋亡誘導試劑，試劑A和試劑B。細胞凋亡誘導試劑A(Apopida)和試劑B(Apobid)分別可以誘導Hela、HEK293、CHO、COS等常見(jiàn)細胞的細胞凋亡。

由于細胞凋亡的誘導具有細胞特異性，細胞凋亡的機制也具有一定的細胞特異性，盡管細胞凋亡誘導試劑A和試劑B可以誘導常見(jiàn)的一些細胞的細胞凋亡，但是我們無(wú)法保證這兩種試劑可以誘導任何一種細胞發(fā)生凋亡。細胞凋亡誘導試劑A和試劑B相互補充，可以誘導更多種類(lèi)的細胞產(chǎn)生凋亡。本試劑盒至少可用于檢測200個(gè)樣品。

試劑盒組份：

細胞凋亡誘導試劑A——————200μl

細胞凋亡誘導試劑B——————200μl

注意事項：對于不同的細胞，需要摸索細胞凋亡誘導試劑的不同濃度和誘導時(shí)間。

儲存條件：-20℃，有效期一年。
注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應揮發(fā)，避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感，避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

實(shí)驗步驟：

(1)實(shí)驗開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數)

操作程序：

注意：最重要的是及時(shí)固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過(guò)度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

1．玻片的處理：一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．細胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養，條件為37℃和5%的CO2，所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長(cháng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

3．培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

7．預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。

8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護膜揭開(kāi)后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據雜交情況可以調節)。

9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

13.滴加化過(guò)氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

15.必要時(shí)蘇木素復染，充分水洗。

16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。

腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)英文名稱(chēng)：TRAF6 ELISA Kit磷化Ack1抗體包裝5g

腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)英文名稱(chēng)：TNFRSF11A/RANK ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝1g

腫瘤壞死因子配體相關(guān)分子1(TL1)英文名稱(chēng)：TL1 ELISA Kit磷化腺苷單磷活化蛋白激β1抗體包裝5g

腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)英文名稱(chēng)：TNFsR-Ⅱ ELISA Kit磷化間變型淋巴瘤激抗體包裝25g

腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)英文名稱(chēng)：TNFsR-Ⅰ ELISA Kit磷化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體包裝5g

腫瘤壞死因子β(TNF-β)英文名稱(chēng)：TNF-β ELISA Kit磷化三磷腺檸檬裂解抗體包裝100ml

腫瘤壞死因子α(TNF-α)英文名稱(chēng)：TNF-α ELISA Kit磷化ATR抗體包裝25ml

腫瘤壞死因子α(TNFα)英文名稱(chēng)：TNFα ELISA Kit核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體包裝500ml

腫瘤蛋白p53(TP53)英文名稱(chēng)：TP53 ELISA Kit天門(mén)冬酰連接糖基化11抗體包裝1g

腫瘤標志物(CA724)英文名稱(chēng)：CA724 ELISA Kit衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體包裝1ml

中性粒細胞明膠相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)英文名稱(chēng)：NGAL ELISA Kit基糖苷類(lèi)磷結構域蛋白抗體包裝100g

中性粒細胞彈性蛋白(NE)英文名稱(chēng)：NE ELISA Kit唾液糖蛋白受體1抗體包裝25g

脂氧A4(LXA4)英文名稱(chēng)：LXA4 ELISA Kit芳香基硫酯F抗體包裝5g

脂聯(lián)(ADP)英文名稱(chēng)：ADP ELISA KitA激錨定蛋白5抗體包裝1mg

脂聯(lián)(Acrp30)英文名稱(chēng)：Acrp30 ELISA Kit小腦脊髓共濟失調蛋白3抗體包裝100g

γ2肌動(dòng)蛋白抗體甘脫氫(GLDC)Infigratinib (BGJ-398; NVP-BGJ398) 是 FGFR 家族的有效抑制劑，抑制 FGFR1，FGFR2，FGFR3 和 FGFR4
細胞凋亡陽(yáng)性對照試劑盒棕褐小單孢 2,5-二氨基-4,6-二羥基嘧啶鹽酸鹽1-磷酸鞘氨Elisa

猴頭 L-(+)-環(huán)己基甘2,3-二磷酸甘油酸Elisa

Frigoribacterium 酸倍米松2,5寡腺苷酸合成Elisa

大腸桿 Fmoc-D-4-苯2,5寡腺苷酸合成2Elisa

枯草芽胞桿 （合成）20-HETEElisa

菊異莖點(diǎn)霉 鹽酸二氟沙星25羥基維生DElisa

蒼黃鏈霉 4-基α-L-吡喃阿伯糖苷25羥基維生D3Elisa

假單孢 4-羥基苯乙2-硫代噻唑烷-4-羧酸Elisa

大腸埃希氏 3,5-二氟溴芐3-硝基酪Elisa

三葉草根瘤 雙酮-D-甘露糖3型1-磷酸鞘氨受體Elisa

委內瑞鏈霉 異龍腦4-羥基壬烯Elisa

紅色紅曲  葉綠5α還原Elisa

冬蟲(chóng)夏草 17α-乙炔基雌二5-甲基四氫Elisa

莫哈韋芽孢桿 針葉櫻桃提取物5羥基乙酸Elisa

海洋桿 羥基酪5羥色Elisa