細胞凋亡染色試劑盒(細胞Hoechst染色)

中文名稱(chēng)：細胞凋亡染色試劑盒(細胞Hoechst染色)

英文名稱(chēng)：Hoechst Staining Kit
產(chǎn)品規格：100次

產(chǎn)品貨號：LZ-01X6323

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

公司產(chǎn)品現貨供應，質(zhì)量有保證、實(shí)驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規格、用途、實(shí)驗原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

實(shí)驗報告：

一、分離與培養：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí)，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

培養操作步驟：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長(cháng)至覆蓋培養板底部2/3面積時(shí)，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì )影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì )導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(cháng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會(huì )增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來(lái)配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(cháng)短根據細胞的類(lèi)型和細胞的密度等實(shí)驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時(shí)即可，白細胞需要培養較長(cháng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

轉化生長(cháng)因子β2(TGF-β2)英文名稱(chēng)：TGF-β2 ELISA Kit載脂蛋白E4抗體包裝25g

轉化生長(cháng)因子β2(TGFβ2)英文名稱(chēng)：TGFβ2 ELISA Kit自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體包裝10mg

轉化生長(cháng)因子β1(TGF-β1)英文名稱(chēng)：TGF-β1 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體包裝50mg

轉化生長(cháng)因子β(TGFβ1)英文名稱(chēng)：TGFβ1 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體包裝25g

轉化生長(cháng)因子α(TGF-α)英文名稱(chēng)：TGF-α ELISA Kit磷化凋亡信號調節激1抗體包裝5g

轉化生長(cháng)因子α(TGFα)英文名稱(chēng)：TGFα ELISA Kit磷化失調癥蛋白1抗體包裝1g

主要組織相容性復合體Ⅲ類(lèi)(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)英文名稱(chēng)：MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit脊髓小腦失調癥蛋白1抗體包裝5g

主要組織相容性復合體Ⅱ類(lèi)(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ)英文名稱(chēng)：MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA Kit磷化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝25g

主要組織相容性復合體Ⅰ類(lèi)(MHCⅠ/H-2Ⅰ)英文名稱(chēng)：MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit磷化凋亡信號調節激1抗體包裝5g

腫瘤特異生長(cháng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)英文名稱(chēng)：TSGF ELISA Kit磷化凋亡信號調節激1抗體包裝1g

腫瘤特異生長(cháng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)英文名稱(chēng)：TGSF ELISA Kit磷化活化復制因子2抗體包裝5g

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